实验protocol展示

Pro 无连接克隆试剂盒：快速启动方案

设计和扩增重叠 PCR 产物

• 1. 设计引物以扩增彼此之间以及与线性化载体具有 15-25 bp 重叠同源性的插入片段。
• 2. PCR 扩增片段并在琼脂糖凝胶上观察。

纯化步骤（推荐）

• 3. 如果 PCR 扩增包含非特异性条带，则对产品或凝胶提取物进行柱纯化。
     （可供选择）将 0.5 μl Assembly Enhancer 和 1.0 μl Cloning Optimizer 添加到 50 μl PCR 产物中。 在 37°C 孵育 5 分钟，然后在 80°C 孵育 20 分钟。

组装反应

• 4.通过紫外分光光度计或通过将目标条带与在同一凝胶上运行的已知分子量标记进行比较来量化插入片段和载体 DNA。

• 5. 在冰上进行以下反应：
     
     
• 6. 对于 1 个插入片段，在 50°C 下孵育 15 分钟。 对于多个插入件或困难的组装，请在 50°C 下孵育 1 小时。
• 7. 立即转化，或将样品储存在-20°C直至转化。

插入物的准备

设计PCR引物为了插入片段

准确的引物设计对于成功的无缝组装反应至关重要。 下图（图 2-5）是设计这些引物的指南。 我们建议首先设计一个 DNA 序列文件，概述插入片段如何在载体中组装。 接下来，PCR 引物的设计应包含每个相邻片段的一小部分序列。 最终，每个引物应在 5' 端具有与相邻片段或载体重叠的序列，并在 3' 端具有插入特异性区域。

这个是诺唯赞的同源重组酶，这是我们正在用的产品。