⭐实验步骤
1-消化细胞，计数

2-铺板：将细胞按不同梯度接种于六孔板，第一次接种可按500，800，1000数量接种，后续可选最佳数量种三个复孔，摇匀后放培箱。GES-1我一般是铺1000个细胞，然后大概长7——8天，细胞克隆就能形成。

3-培养：置于培箱培养7-14天（视细胞生长情况而定），每3天换液并观察细胞状态，待出现肉眼可见克隆时可终止培养，克隆就是当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0 mm之间。（所以在显微镜下看到细胞聚集有50个细胞左右的时候就可以终止培养了）

4-染色：弃旧培基（直接倒，残余液体用枪头吸干），PBS洗两遍，加入4%的多聚甲醛固定15——20分钟后，加0.1%的结晶紫染色液染色15——20分钟，回收结晶紫，用自来水将残余结晶紫洗干净（像图7这样洗就行，无需流水冲洗！），晾干

5-拍照：待板子晾干后，放在平板灯上拍照，整个板子和单个孔都要拍照📸，计克隆数。